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實驗時刻
軟瓊脂克隆實驗
軟瓊脂克隆形成又名非錨定依賴性生長實驗(Anehorage-independentassay），利用軟瓊脂為培養(yǎng)介質(zhì)，使細胞在懸浮狀態(tài)下生長。
軟瓊脂克隆形成實驗方法簡單，適用于貼壁生長的細胞。
細胞克隆形成率表示接種細胞后貼壁的細胞成活并形成克隆的數(shù)量，主要反映細胞群體依賴性和增殖能力兩個重要性狀。
Part 01.
實驗材料
Part 02.
實驗操作流程
常見問題與解答
A：細胞接種密度與最終實驗結(jié)果密切相關(guān)，若細胞太多，形成克隆數(shù)目太多，處理結(jié)果時數(shù)克隆不僅容易出錯，而且圖片很難看（下圖左）。細胞太少，不能形成克隆。如下圖所示：
上圖我們看到3株癌細胞在6孔板克隆形成圖片，第一個明顯鋪板細胞太密集，導致難以統(tǒng)計數(shù)據(jù)；中間那個正好，最后面那個細胞數(shù)量偏少，且細胞鋪板不均勻。因此，為了獲得美觀的圖片和準確的數(shù)據(jù)，第一次實驗最好設置細胞接種梯度，如500-1000-2000-5000個/孔挑選出最合適的接種密度。細胞在進行克隆形成實驗時要求有95%以上的分散度，否則結(jié)果的準確度會受到很大影響；另外注意細胞計數(shù)時建議多計數(shù)幾次。
A：并非每種細胞都可以形成克隆，克隆形成率與細胞本身增殖能力有關(guān)。還與接種細胞密度，加入培養(yǎng)液的體積、血清濃度有關(guān)。因該實驗處理時間較長，應給細胞多加培養(yǎng)基，如每孔4ml，或者3天更換一次培養(yǎng)基，以供給細胞充足的營養(yǎng)。
END
